Perbedaan antara Klenow dan T4 DNA polimerase

Itu perbedaan utama Antara Klenow dan T4 DNA polimerase adalah itu Fragmen klenow adalah fragmen besar E. coli DNA polimerase 1 sedangkan T4 DNA polimerase adalah DNA polimerase 1 bakteriofag T4.

DNA polimerase adalah enzim yang mengkatalisasi pembentukan DNA dengan menambahkan deoksiribonukleotida ke ujung 3'-oh dari primer yang sudah ada sebelumnya. Ada berbagai jenis polimerase DNA. Sebagian besar polimerase DNA yang digunakan dalam biologi molekuler adalah prokariotik DNA polimerase. Fragmen Klenow dan T4 DNA polimerase adalah dua jenis DNA polimerase yang memiliki asal prokariotik. Fragmen klenow adalah fragmen besar yang dihasilkan dari pembelahan E.coli DNA polimerase 1 menjadi dua fragmen oleh bakteri protease subtilisin. T4 DNA polimerase adalah DNA polimerase 1 bakteriofag T4. Baik Klenow dan T4 DNA polimerase memiliki 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' aktivitas eksonuklease. Mereka berdua kekurangan aktivitas eksonuklease 5 '→ 3', membuatnya lebih cocok untuk banyak aplikasi dalam biologi molekuler.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Klenow 
3. Apa itu T4 DNA Polymerase
4. Kesamaan antara Klenow dan T4 DNA polimerase
5. Perbandingan berdampingan - Klenow vs T4 DNA polimerase dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa itu Klenow?

Fragmen Klenow adalah DNA polimerase yang berguna dalam biologi molekuler. Kapan E. coli DNA polimerase 1 mengalami pencernaan proteolitik oleh protease bakteri, subtilisin, itu menghasilkan dua fragmen: satu adalah fragmen besar, dan yang lainnya adalah fragmen kecil. Fragmen klenow adalah fragmen besar yang berukuran 68 kDa. Fragmen klenow memiliki 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' exonuclease (proofreading) Kegiatan DNA pol i. Aktivitas eksonuklease 3 '→ 5' dari fragmen Klenow memfasilitasi penghapusan basis yang ditambahkan secara tidak benar saat polimerisasi berlangsung. Fragmen klenow tidak mengandung 5 '→ 3' aktivitas eksonuklease, yang ditunjukkan oleh panjang penuh atau utuh E. coli DNA polimerase 1. Itu menguntungkan ketika hanya aktivitas polimerisasi yang diperlukan sendiri. Fragmen klenow digunakan untuk mengisi overhang 5 ', sintesis probe, pengurutan DNA, sintesis DNA untai ganda, sintesis untai kedua cDNA dan mutagenesis yang diarahkan ke lokasi.

Gambar 01: fragmen klenow

Dalam aplikasi tertentu, aktivitas eksonuklease 3 '→ 5' dari fragmen klenow juga menjadi tidak diinginkan. Itu dapat dihapus dengan memperkenalkan mutasi ke gen yang mengkode fragmen klenow. Fragmen klenow yang dihasilkan dikenal sebagai fragmen exo-klenow. Oleh karena itu, fragmen exo-klenow hanya memiliki aktivitas polimerase 5 '→ 3' E. coli polimerase 1.

Apa itu T4 DNA Polymerase?

T4 DNA polimerase adalah DNA polimerase yang mengkatalisasi sintesis DNA. Ini adalah protein yang dikodekan oleh bakteriofag T4. Secara struktural, T4 DNA polimerase adalah protein residu asam amino 898 (berat molekul 103.6 kDa). Itu membutuhkan templat dan primer untuk mengkatalisasi sintesis.

Gambar 02: T4 DNA polimerase

Mirip dengan fragmen Klenow, T4 DNA polimerase memiliki keduanya 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' aktivitas eksonuklease exonuclease. Selain itu, ia juga tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5 '→ 3'. T4 DNA Polymerase berguna dalam pengisian ujung fragmen DNA 5'. Ini juga sering digunakan untuk DNA 5'-end atau 3'-end dari DNA untai ganda. T4 DNA polimerase sering digunakan dalam kloning tumpul. Aktivitas 3 '→ 5' exonuclease (proofreading) dari T4 DNA polimerase lebih kuat (lebih dari 200 kali) dari fragmen Klenow. Yang paling penting, T4 DNA polimerase memiliki proses yang tinggi (400 nukleotida per detik).

Apa kesamaan antara Klenow dan T4 DNA polimerase?

• Klenow dan T4 DNA polimerase adalah dua polimerase prokariotik.
• Kedua polimerase memiliki 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' aktivitas eksonuklease.
• Mereka tidak menunjukkan 5 '→ 3' aktivitas eksonuklease.
• Kedua enzim membutuhkan templat dan primer untuk mengkatalisasi sintesis DNA.
• Enzim ini dapat diaktifkan panas pada 75 ⁰

Apa perbedaan antara Klenow dan T4 DNA polimerase?

Perbedaan utama antara Klenow dan T4 DNA polimerase adalah asal dari masing -masing enzim. Fragmen Klenow berasal dari bakteri sedangkan T4 DNA polimerase berasal dari bakteriofag yang merupakan virus. T4 DNA polimerase memiliki proses yang tinggi dari fragmen Klenow. Selain itu, T4 DNA polimerase memiliki aktivitas proofreading yang kuat daripada fragmen klenow. Dengan demikian, ini adalah perbedaan lain antara Klenow dan T4 DNA polimerase.

Info-grafik di bawah ini mencantumkan lebih banyak perbedaan antara Klenow dan T4 DNA polimerase dalam bentuk tabel.

Ringkasan -Klenow vs T4 DNA polimerase

Fragmen klenow adalah fragmen besar E. coli DNA polimerase 1. Hanya memiliki 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' kegiatan eksonuklease. Tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5 '→ 3'. coli DNA pol 1. Oleh karena itu, fragmen klenow adalah bakteri polimerase. Di sisi lain, T4 DNA polimerase adalah polimerase yang dikodekan oleh bakteriofag T4. Mirip dengan fragmen Klenow, ini mengandung 5 '→ 3' polimerase dan 3 '→ 5' aktivitas eksonuklease, dan tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5 '→ 3'. Namun, T4 DNA polimerase memiliki prosesitas yang tinggi dan aktivitas proofreading yang tinggi daripada fragmen Klenow. Jadi, ini adalah perbedaan utama antara Klenow dan T4 DNA polimerase.

Referensi:

1. “DNA polimerase, T4.”DNA Polymerase, T4 - Manual Enzim Worthington, tersedia di sini.
2. Rittié, Laure, dan Bernard Perbal. “Enzim yang digunakan dalam biologi molekuler: panduan yang berguna.”Jurnal Komunikasi dan Pensinyalan Sel, Springer Belanda, Juni 2008, tersedia di sini.

Gambar milik:

1. “Polymerasedomains” - Bank Data Protein (Domain Publik) melalui Commons Wikimedia 

2. "T4-DNA-Polymerase" oleh ChemPro-J. Wang, hlm. Yu, t. C. Lin, w. H. Konigsberg, t. A. Steitz (1996). “Struktur kristal dari fragmen NH2-terminal T4 DNA polimerase dan kompleksnya dengan DNA untai tunggal dan dengan ion logam divalen” Biokimia 35: 8110-8119. Doi: 10.1021/BI960178R. (CC0) via Commons Wikimedia