Perbedaan antara halaman SDS dan Western blot
Perbedaan utama - Halaman SDS vs Western blot
Western blotting adalah teknik yang mendeteksi protein spesifik dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah kunci: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Elektroforesis gel sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel (Halaman SDS) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein sesuai dengan ukurannya (bobot molekul). Western blot adalah lembar khusus dari membran blotting yang digunakan untuk mentransfer pola protein yang sama di halaman SDS. Perbedaan utama antara halaman SDS dan Western blot adalah itu Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein dalam campuran ketika Western blot memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein spesifik dari campuran. Keduanya berguna dalam studi analisis protein.
ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu halaman SDS
3. Apa itu Western blot
4. Perbandingan berdampingan - halaman SDS vs Western blot
5. Ringkasan
Apa itu halaman SDS?
SDS Page adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ini biasanya digunakan dalam biokimia, genetika, forensik dan biologi molekuler. Setelah protein diekstraksi dari sampel, mereka dijalankan pada gel yang terdiri dari SDS dan poliakrilamida. SDS adalah deterjen anionik yang digunakan untuk linearisasi protein (protein denature) dan untuk memberikan muatan negatif untuk protein linier yang sebanding dengan massa molekulnya. Poliakrilamida menjadi dukungan yang solid untuk gel. Protein terdenaturasi yang bermuatan negatif bermigrasi ke ujung positif dari peralatan melalui gel. Menurut ukuran protein, kecepatan migrasi berbeda antara protein dan pemisahan terjadi. Oleh karena itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.
Persiapan gel poliakrilamida untuk fraksinasi protein adalah langkah penting dalam halaman SDS. Konsentrasi poliakrilamida yang benar dan jenis zat pengikat silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fisik gel, yang membuat pemisahan aktual dari protein yang berbeda. Ukuran pori gel harus dikelola dengan benar untuk pemisahan yang efektif. Namun, halaman SDS dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.
Teknik Halaman SDS memiliki keterbatasan besar dalam analisis protein. Karena SDS mendenaturasi protein sebelum pemisahan, itu tidak memungkinkan deteksi aktivitas enzimatik, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll.
Gambar 01: Halaman SDS
Apa itu Western blot?
Teknik Western blotting memungkinkan deteksi protein spesifik dari campuran protein dan pengukuran kuantitas dan berat molekul protein. Western blot adalah membran yang digunakan selama prosedur blotting untuk mendapatkan gambar cermin dari pola protein dalam gel SDS-poliacrylamide. Membran yang digunakan untuk Western blotting sebagian besar terdiri dari nitroselulosa atau polivinilidena difluoride (PVDF). Membran dengan protein yang ditransfer dapat digunakan untuk mengidentifikasi protein yang diinginkan. Itu membutuhkan antibodi berkualitas tinggi untuk mendeteksi protein yang diinginkan dengan hibridisasi. Antibodi berikatan dengan antigen spesifiknya dan mengungkapkan keberadaan antigen yang diinginkan yang merupakan protein.
Mentransfer protein dari gel poliakrilamida SDS ke blot barat dilakukan dengan elektrobloting. Ini adalah metode yang efektif dan cepat yang menyebabkan protein menjadi elektrofor keluar dari gel dan masuk ke membran nitroselulosa (Western blot).
Gambar 02: Western blot
Apa perbedaan antara halaman SDS dan Western blot?
SDS Page vs Western blot | |
| SDS Page adalah teknik elektroforesis gel. | Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mendeteksi protein spesifik dari campuran. |
| Menggunakan | |
| Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein sesuai dengan ukurannya. | Western blot memungkinkan transfer protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah polanya & memungkinkan hibridisasi dengan antibodi spesifik. |
| Kerugian | |
| Denaturasi protein, berbiaya tinggi, dan adanya bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan dari teknik ini. | Teknik ini memakan waktu dan membutuhkan kondisi pribadi yang berpengalaman dan spesifik yang berpengalaman. |
Ringkasan -SDS Page vs Western blot
SDS Page dan Western blot adalah dua metode yang terlibat dalam analisis protein. Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein yang mudah pada gel sesuai dengan berat molekulnya. Western blot membantu mengkonfirmasi keberadaan dan kuantitas protein spesifik melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Inilah perbedaan antara halaman SDS dan Western blot.
Referensi:
1. Blancher, c., dan a. Jones. “Teknik SDS -Halaman dan Western blotting.”Metode dalam Kedokteran Molekuler. U.S. Perpustakaan Kedokteran Nasional, N.D. Web. 27 Mar. 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, dan David H. Petering. “Native SDS-PAGE: Pemisahan elektroforetik resolusi tinggi protein dengan retensi sifat asli termasuk ion logam terikat.”Metallomics: Ilmu Biometal Terpadu. U.S. Perpustakaan Kedokteran Nasional, Mei 2014. Web. 27 Mar. 2017.
Gambar milik:
1. “Elektroforesis SDS-PAGE” oleh Bensaccount di Inggris Wikipedia (CC oleh 3.0) Via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114a" oleh Amanthabagdon - karya sendiri (domain publik) melalui Commons Wikimedia
