Perbedaan antara ligase DNA T4 dan T7

Perbedaan Utama - T4 vs T7 DNA Ligase

Ligase DNA adalah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekuler. Ia berfungsi sebagai lem molekuler untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk antara ujung hidroksil 3 dari gugus gula dan kelompok fosfat 5 'akhir. Ligase DNA sangat penting dalam proses replikasi untuk bergabung dengan fragmen Okazaki dari untai lagging dan selama mekanisme perbaikan DNA dan in vitro Kloning Eksperimen untuk bergabung dengan gen minat yang diinginkan dengan genom vektor. Ada dua ligase DNA utama yang digunakan saat ini oleh ahli biologi molekuler: ligase DNA T4 dan T7. Ligase DNA T4 adalah salah satu enzim pertama yang diisolasi dari bakteriofag T4. T7 DNA ligase, yang merupakan protein yang lebih kecil, adalah enzim yang diisolasi dari bakteriofag T7. Ini adalah perbedaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa aksi DNA ligase
3. Apa itu T4 DNA Ligase
4. Apa itu T7 DNA Ligase
4. Kesamaan antara ligase DNA T4 dan T7
5. Perbandingan berdampingan - T4 vs T7 DNA ligase dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa aksi DNA ligase?

Ligasi DNA terjadi dalam reaksi tiga langkah. Langkah pertama adalah serangan nukleofilik pada alfa-fosfor ATP yang menghasilkan enzim kovalen-adenilat di mana AMP terkait dengan nitrogen rantai samping terminal lisin. Pada langkah kedua, serangan nukleofilik terjadi pada fosfor enzim-adenilat oleh substrat DNA 5'-fosfat yang diakhiri, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenilat DNA. Pada langkah terakhir, DNA-adenylate diserang oleh 3'-oh dari untai DNA lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polinukleotida.

Apa itu T4 DNA Ligase?

Ligase T4 adalah ligase pertama yang diisolasi dan diidentifikasi oleh Meselson, Weigle, dan Kellenberger dan merupakan ligase komersial pertama yang diproduksi. T4 DNA ligase adalah enzim dependen ATP yang mengkatalisasi pembentukan ikatan fosfodiester. Ini adalah rantai polipeptida tunggal dengan 487 residu asam amino dan memiliki berat molekul sekitar 77 kDa. PH optimal untuk aktivitasnya terletak pada kisaran 7.5 - 8.

Gambar 01: Ligase DNA T4

T4 DNA ligase, seperti namanya, hadir dalam bakteriofag T4 dan diisolasi ketika fag menghasilkan enzim saat infeksi dengan -E. coli. Enzim ligat dupleks DNA untai ganda dengan ujung tumpul dan fragmen yang harus diikat harus berada di dekat satu sama lain.

Apa itu T7 DNA Ligase?

T7 ligase adalah 41 kDa protein yang diproduksi oleh bakteriofag T7 dan diisolasi dengan menginfeksi E. coli sel. Fungsi utama ligase T7 adalah untuk mengikat dupleks DNA melalui hubungan fosfodiester dan bergabung dengan fragmen DNA di dekatnya selama percobaan kloning. PH optimal untuk ligase DNA T7 terletak pada kisaran 7.0 - 7.2. T7 ligase tergantung pada ATP. Ligase DNA T7 juga mampu menganut hibrida DNA dan RNA, sehingga menimbulkan konformasi abnormal selama transkripsi; Namun, fenomena ini masih dalam penelitian in vitro studi.

Apa kesamaan antara ligase DNA T4 dan T7?

Ligase DNA T4 dan T7 berpartisipasi dalam reaksi ligasi dengan anil dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara ujung 3 'OH dan ujung fosfat 5' dari fragmen DNA.
Kedua enzim ligate tumpul mengakhiri dupleks DNA yang berada di dekat satu sama lain.
Kedua enzim itu tergantung pada ATP.
Enzim ini diisolasi dengan menginfeksi E. coli sel dengan bakteriofag tertentu.
Aplikasi kedua enzim meliputi:
- Kloning molekuler - untuk mengikat gen yang menarik ke vektor
- Perbaikan DNA - Untuk memperbaiki ceruk untai ganda
- Replikasi DNA in vitro
- Reaksi rantai ligase

Apa perbedaan antara T4 dan T7 DNA ligase?

Ligase DNA T4 vs T7
Jenis ligase DNA T4 dari ligase DNA yang diisolasi dari bakteriofag T4 dan terlibat dalam meligasi fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester.	T7 DNA Ligase Jenis DNA ligase yang diisolasi dari bakteriofag T7 dan terlibat dalam meligasi fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester.
Ukuran protein
Ukuran T4 DNA ligase adalah 77 kDa - lebih besar dibandingkan dengan T7 DNA ligase.	Ukuran T7 DNA ligase adalah 41 kDa.
PH optimal
Kisaran pH yang bekerja T4 DNA ligase adalah 7.5 - 8.0.	Kisaran pH yang bekerja T7 DNA ligase adalah 7.0 - 7.2.

Ringkasan -T4 vs T7 DNA Ligase

Ligase DNA adalah kelas penting dari enzim yang terlibat dalam kloning molekuler untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandung gen yang menarik. Reaksi ligasi adalah reaksi yang memanfaatkan energi dan ada studi penelitian baru yang sedang berlangsung untuk meningkatkan akurasi melalui modulasi ligase yang tersedia. Ligase DNA T4 dan T7 adalah dua jenis enzim ligase DNA penting yang digunakan dalam teknik biologis molekuler. T7 DNA ligase juga merupakan hasil dari penelitian yang didasarkan pada ligase primer yang diisolasi dari T4 yang terinfeksi E. coli. T7 digambarkan lebih efisiensi dan keakuratan dalam menjalankan fungsinya karena ukurannya yang lebih kecil. Inilah perbedaan antara ligase T4 dan T7.

Unduh Versi PDF dari T4 vs T7 DNA Ligase

Anda dapat mengunduh versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi pdf di sini perbedaan antara ligase T4 dan T7.

Referensi:

1. “DNA Ligase, T4.”DNA Ligase, T4 - Manual Enzim Worthington, tersedia di sini. Diakses 22 Agustus. 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. “Bacteriophage T7 DNA Ligase Overexpression, Purification, Crystalization, dan Karakterisasi.”Jurnal Kimia Biologi, 10 Mei 1996, tersedia di sini. Diakses 22 Agustus. 2017.