Apa perbedaan antara FPLC dan HPLC

Itu perbedaan utama FPLC dan HPLC adalah bahwa FPLC adalah jenis kromatografi cair yang memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida dan peptida, sedangkan HPLC adalah jenis kromatografi cair yang memisahkan senyawa berat molekul kecil kecil.

Kromatografi cair adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan sampel menjadi komponen individualnya. Pemisahan ini terjadi karena interaksi sampel spesifik dengan fase seluler dan stasioner. Komponen dalam sampel dipisahkan berdasarkan afinitas masing -masing komponen untuk fase gerak dalam kromatografi cair. Saat fase gerak dan sampel melewati kolom, komponen sampel mulai terpisah menjadi pita yang dapat dideteksi dengan spektroskopi UV-vis. Oleh karena itu, FPLC dan HPLC adalah dua jenis teknik kromatografi cair.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu FPLC 
3. Apa itu HPLC
4. Kesamaan - FPLC dan HPLC
5. FPLC vs HPLC dalam bentuk tabel
6. Ringkasan - FPLC vs HPLC

Apa itu FPLC?

FPLC adalah jenis kromatografi cair yang memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. Itu kromatografi cair protein cepat (FPLC) pertama kali dikembangkan dan dipasarkan di Swedia oleh Farmacia Company pada tahun 1982. Sering digunakan untuk menganalisis atau memurnikan campuran protein. Ini terjadi berdasarkan prinsip afinitas komponen sampel untuk memindahkan cairan (fase gerak) dan bahan padat berpori (fase stasioner). Dalam FPLC, fase gerak adalah buffer, dan fase stasioner adalah resin yang terdiri dari manik -manik. Biasanya terdiri dari agarosa yang terkait silang dikemas ke dalam kaca silinder atau kolom plastik.

Gambar 01: Peralatan FLPC (kromatografi cairan protein cepat)

Di sebagian besar strategi FLPC, resin pertukaran ion digunakan. Oleh karena itu, protein yang menarik akan berikatan dengan resin dengan interaksi muatan. Teknik FLPC juga menggunakan dua buffer: buffer 1 (buffer berjalan) dan buffer 2 (buffer elusi). Awalnya, saat menjalankan buffer dan campuran sampel berjalan melalui kolom, protein yang menarik dalam campuran akan berikatan dengan resin dengan interaksi muatan. Tetapi protein yang menarik menjadi terdisosiasi dan kembali ke larutan dalam buffer elusi ketika buffer elusi berjalan melalui kolom di akhir proses. Kemudian, larutan (eluant yang mengandung protein yang menarik) melewati dua detektor, yang mengukur konsentrasi garam dan konsentrasi protein. Karena setiap protein dielusi, itu muncul sebagai "puncak" selama deteksi dan dapat dikumpulkan untuk penggunaan lebih lanjut.

Apa itu HPLC?

HPLC adalah jenis kromatografi cair yang memisahkan senyawa dengan berat molekul kecil. Pada tahun 1969, HPLC pertama diproduksi secara komersial oleh Waters Corporation, USA. Dalam kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), campuran sampel (analit) dalam pelarut (fase gerak) dipompa melalui kolom dengan bahan pengemasan kromatografi (fase stasioner) pada tekanan tinggi. Campuran sampel dilakukan oleh aliran gas pembawa yang bergerak helium atau nitrogen.

Gambar 02: HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi)

Komponen dalam campuran sampel yang memiliki jumlah interaksi paling sedikit dengan fase stasioner atau jumlah interaksi terbanyak dengan fase gerak akan keluar dari kolom lebih cepat. Di sisi lain, komponen dalam campuran sampel yang memiliki jumlah interaksi terbanyak dengan fase diam atau jumlah interaksi paling sedikit dengan fase gerak akan keluar dari kolom lebih lambat. Berdasarkan prinsip interaksi di atas, komponen campuran sampel dapat dipisahkan. Selain itu, detektor instrumen mengidentifikasi setiap komponen campuran sampel yang keluar dari kolom. HPLC digunakan untuk memeriksa sampel lingkungan dan biologis untuk ada atau tidak adanya senyawa yang diketahui, seperti obat, racun atau pestisida. Ini digunakan di berbagai industri seperti farmasi, lingkungan, forensik, dan bahan kimia.

Apa kesamaan antara FPLC dan HPLC?

1. FPLC dan HPLC adalah jenis kromatografi cair.
2. Keduanya digunakan untuk memisahkan dan mengidentifikasi sampel biologis.
3. Mereka memiliki fase gerak cair dan fase stasioner padat.
4. Kedua teknik menggunakan kolom untuk melewati sampel.
5. Teknik -teknik ini menggunakan pompa, detektor, katup, dan perangkat lunak untuk pemisahan dan deteksi sampel.

Apa perbedaan antara FPLC dan HPLC?

FPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. HPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memisahkan senyawa berat molekul kecil. Jadi, ini adalah perbedaan utama antara FPLC dan HPLC. Selain itu, FPLC menggunakan pH dan monitor konduktivitas juga sebagai kolektor fraksi. Sebaliknya, HPLC tidak menggunakan pH dan monitor konduktivitas dan kolektor fraksi.

Infografis di bawah ini mencantumkan lebih banyak perbedaan antara FPLC dan HPLC dalam bentuk tabel.

Ringkasan -FPLC vs HPLC

Kromatografi adalah teknik analitik laboratorium yang digunakan untuk pemisahan komponen dari campuran. Ini dibagi menjadi beberapa jenis seperti kromatografi kolom, kromatografi gas, kromatografi cair, kromatografi pertukaran ion, dll. FPLC dan HPLC adalah dua jenis teknik kromatografi cair. FPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. Di sisi lain, HPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memisahkan senyawa dengan berat molekul kecil. Dengan demikian, ini adalah ringkasan dari apa perbedaan antara FPLC dan HPLC.

Referensi:

1. “Kromatografi Cair Protein Cepat."Berita-Medis.net, 25 Jan. 2019.
2. “Apa itu kromatografi cair HPLC/berkinerja tinggi?"Pelatihan laboratorium, 11 Mei 2021.

Gambar milik:

1. "Peralatan Kromatografi" oleh GIAC83 - karya sendiri (CC BY -SA 2.5) Via Commons Wikimedia
2. "HPLC" oleh Sam.F. - Pekerjaan Sendiri (CC BY-SA 3.0) Via Commons Wikimedia