Apa perbedaan antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas

Itu Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel tergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas tergantung pada afinitas analit dengan ligan yang diimobilisasi.

Istilah kromatografi dalam kimia analitik mengacu pada proses pemisahan komponen dalam campuran menggunakan teknik yang berbeda. Kromatografi adalah nama kolektif yang mewakili berbagai jumlah metode yang berbeda untuk pemisahan.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu kromatografi filtrasi gel 
3. Apa itu kromatografi afinitas 
4. Filtrasi gel vs kromatografi afinitas dalam bentuk tabel
5. Ringkasan -Gel Filtration vs Affinity Chromatography 

Apa itu kromatografi filtrasi gel?

Kromatografi filtrasi gel adalah teknik analitik di mana pemisahan komponen tergantung pada perbedaan berat atau ukuran molekul. Teknik ini juga dikenal sebagai kromatografi ukuran-eksklusi atau kromatografi molekuler. Teknik pemisahan dalam proses ini tergantung pada perbedaan kemampuan molekul dalam sampel untuk masuk ke dalam pori-pori medium filtrasi gel.

Dalam teknik filtrasi gel, fase stasioner berisi manik-manik bahan terhidrasi, seperti spons yang memiliki pori-pori dimensi molekul yang mengandung kisaran ukuran yang sempit. Jika kita melewati larutan berair yang terdiri dari molekul dari berbagai ukuran melalui kolom yang mengandung "saringan molekul" ini, molekul yang lebih besar dari pori -pori dari media filtrasi bergerak dengan cepat melalui kolom. Sebaliknya, molekul yang lebih kecil memasuki pori -pori gel dan cenderung bergerak perlahan melalui kolom. Molekul dielusi dari kolom dalam urutan penurunan ukuran molekul. Di sini, batas pengecualian gel adalah massa molekul molekul terkecil yang tidak dapat menembus pori -pori dari gel yang diberikan.

Ada berbagai jenis teknik filtrasi gel, seperti metode filtrasi gel tidak langsung, filtrasi gel steady-state, dialisis manik gel, dll. Kromatografi filtrasi gel tidak langsung berguna dalam penentuan hormon tiroid gratis. Kromatografi filtrasi gel steady-state adalah teknik tidak langsung yang sebagian besar berguna untuk pengukuran steroid bebas seperti kortisol, testosteron, dll. Dialisis manik gel, di sisi lain, adalah modifikasi filtrasi gel steady-state yang relatif lebih sederhana.

Apa itu kromatografi afinitas?

Affinity Chromatography adalah teknik analitik dan metode pemisahan yang tergantung pada interaksi pengikatan spesifik antara ligan yang diimobilisasi dan mitra yang mengikatnya. Beberapa contoh termasuk pengikatan antibodi-antigen, pengikatan enzim-substrat, dan pengikatan enzim penghambat. Oleh karena itu, teknik ini memiliki banyak aplikasi penting dalam pemurnian asam nukleat, pemurnian protein dari ekstrak sel, dan pemurnian dari darah.

Dalam teknik ini, properti yang paling penting adalah imobilisasi ligan. Kita dapat menggunakan berbagai bahan seperti akrilat dan gel silika untuk ini. Penting untuk mencegah gangguan sterik dari molekul target ke ligan. Selain itu, inhibitor melekat pada fase padat. Kami menyebut penghambat ini sebagai spacer. Secara klasik, spacer terdiri dari rantai hidrokarbon.

Fase stasioner kromatografi afinitas berisi inti, spacer, dan ligan. Terkadang, ia juga memiliki ion logam yang digabungkan ke ligan. Fase padat yang paling disukai untuk fase stasioner dalam teknik ini adalah agarosa gel karena mudah dikeluarkan untuk mengisi dan mengemas kolom dengan lapisan resin dengan ukuran apa pun, dan cukup besar untuk biomolekul untuk mengalir dengan bebas ke dalam dan melalui manik -manik. Ligan dapat secara kovalen menempel pada polimer manik dengan berbagai cara. Senyawa spacer yang paling umum adalah sianogen bromida, epoksida, epoksida dengan asam C6, dan diamin. Di sisi lain, ligan yang dapat kita gunakan berbeda sesuai dengan target, e.G., Antibodi-antigen, besi atau aluminium-fosfoprotein, avidin-biotin, glutathione-GST, protein chelator-nya yang ditandai, dll.

Apa perbedaan antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas?

Kromatografi adalah teknik analitik yang penting. Kromatografi filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah dua variasi penting dari kromatografi. Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel tergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas tergantung pada afinitas analit dengan ligan yang diimobilisasi dimobilisasi.

Ringkasan -Gel Filtration vs Affinity Chromatography

Ada berbagai jenis teknik kromatografi sesuai dengan aplikasinya dan sifat sampel analit. Filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah dua jenis teknik seperti itu. Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel tergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas tergantung pada afinitas analit dengan ligan yang diimobilisasi dimobilisasi.

Referensi:

1. “Filtrasi gel." Tinjauan umum | Topik ScienceDirect.
2. “Kromatografi afinitas: prinsip -prinsipnya." Biotek Cube.

Gambar milik:

1. “Gel Filtration Chromatography” oleh Matasnavickas - Karya Sendiri (CC BY -SA 4.0) Via Commons Wikimedia
2. "Kolom Kromatografi" (CC0) melalui SVG gratis