Perbedaan antara kloning dan subkloning

Perbedaan utama - kloning vs subkloning
 

Kloning dan subkloning adalah prosedur biologis molekuler yang menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetik yang memiliki DNA atau gen yang menarik. Kloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang berkepentingan ke dalam vektor, replikasi dalam bakteri inang, dan produksi sel atau organisme yang merupakan salinan yang tepat dari makeup genetik. Subkloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang diminati, yang sudah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasi dalam bakteri inang, dan produksi salinan sel atau organisme yang identik secara genetik secara genetis identik. Perbedaan utama antara kloning dan subkloning adalah itu, Dalam kloning, gen yang menarik, yang pernah diikat ke dalam vektor, melanjutkan proses kloning sementara, dalam subkloning, gen yang sudah dikloning dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan kembali ke dalam vektor penerima dan melanjutkan proses.

ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa yang kloning
3. Apa itu subkloning
4. Perbandingan berdampingan - kloning vs subkloning
5. Ringkasan

Apa yang kloning?

Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetik. Di alam, kloning terjadi dengan cara reproduksi aseksual. Ketika tidak ada rekombinasi atau perubahan genetik, sel anak menerima susunan genetik yang sama dari induk. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon dengan fisi biner, pemula, mitosis, dll.  Dalam biologi molekuler, gen kloning atau fragmen spesifik DNA adalah metode yang populer untuk mempelajari struktur dan fungsi bagian DNA tertentu tersebut.

Tujuan utama kloning molekuler adalah untuk membuat jutaan salinan sel atau organisme yang identik secara genetik yang bertuliskan fragmen DNA yang menarik (terutama gen). Itu menciptakan organisme dengan salinan genetik yang tepat dari orang lain. Terutama, gen spesifik dikloning dalam studi molekuler untuk mendapatkan informasi struktural dan fungsional dan untuk sekuensing DNA. Juga, untuk produksi protein atau produk spesifik dalam skala besar, kloning banyak digunakan.

Prosedur kloning

Langkah -langkah dasar prosedur kloning adalah sebagai berikut.

1. Identifikasi dan isolasi gen yang diminati. (Amplifikasi gen yang diminati oleh PCR).
2. Pencernaan pembatasan gen yang diminati (restriksi endonuklease memotong gen).
3. Pencernaan pembatasan DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuclease pembatasan yang sama).
4. Penyisipan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
5. Transformasi vektor rekombinan menjadi bakteri inang.
6. Isolasi dan identifikasi bakteri yang diubah (vektor plasmid harus mengandung gen yang dapat dipilih, paling umum gen resistensi antibiotik untuk menyaring bakteri yang diubah).
7. Ekspresi gen rekombinan di dalam host.

Figur_01: Prosedur kloning

Apa itu subkloning?

Subkloning adalah prosedur memindahkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsionalitas gen yang diinginkan. Dalam metode ini, dua vektor terlibat; yaitu, vektor induk dan vektor tujuan. Sisipan kloning dipindahkan lagi ke vektor kedua dalam subkloning. Tujuan mentransfer gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi dalam fragmen DNA yang sudah dikloning dan mengekspresikannya sendiri. Enzim pembatasan digunakan dalam prosedur ini di awal.

Prosedur subkloning

Langkah dasar subkloning adalah sebagai berikut.

1. Dengan bantuan pembatasan endonucleases, pemisahan DNA yang diminati dalam plasmid donor (vektor induk).
2. Amplifikasi DNA yang menarik menggunakan PCR.
3. Pemurnian Produk PCR (DNA Bunga) dengan elektroforesis gel.
4. Pembukaan plasmid penerima dengan endonuklease restriksi yang sama digunakan untuk memisahkan DNA yang menarik dalam plasmid induk.
5. Ligasi DNA yang menarik (gen) ke dalam plasmid penerima untuk membuat plasmid subkloned.
6. Transformasi vektor subklon menjadi bakteri inang yang kompeten.
7. Penyaringan sel yang diubah.
8. Pemurnian DNA plasmid dan penggunaan untuk sekuensing DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.

Subkloning dilakukan pada kesempatan mengisolasi satu gen dari kelompok gen yang dikloning atau ketika gen yang diinginkan diperlukan untuk mentransfer ke plasmid yang berguna untuk melihat fungsi yang tepat dari gen yang diminati.

Figur_02: Prosedur subkloning

Apa perbedaan antara kloning dan subkloning?

Ringkasan - Kloning vs Subkloning

Kloning menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetik dengan gen atau DNA yang dimasukkan. Ini berlangsung melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang menarik ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteri inang. Subkloning berbagi langkah serupa dengan kloning. Namun, dalam subkloning, fragmen DNA yang sudah dikloning (gen yang menarik) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteri inang. Itulah perbedaan utama antara kloning dan subkloning.

Referensi

1. Lodish, Harvey. “Kloning DNA dengan vektor plasmid.”Biologi Sel Molekuler. Edisi ke -4. U.S. Perpustakaan Kedokteran Nasional, 01 Jan. 1970. Web. 05 Mar. 2017
2. “Subkloning.”Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 Feb. 2017. Web. 06 Mar. 2017
3. “Subkloning.”Subkloning | Buka Artikel Akses | Jurnal Akses Terbuka | Prosiding Konferensi | Editor | Penulis | Pengulas | peristiwa ilmiah. N.P., N.D. Web. 06 Mar. 2017
4. Wackerhage, Henning. “Cara Subklon."Cara Subklon. N.P., 01 Jan. 1970. Web. 06 Mar. 2017

Gambar milik

1. Prosedur Kloning Molekul - oleh CNX OpenStax [CC oleh 4.0], via Wikimedia Commons
2. Prosedur subkloning - oleh pengunggah asli adalah takometer di Wikipedia Inggris (ditransfer dari EN.Wikipedia ke Commons.) [CC dengan 2.5], via Wikimedia Commons