Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah metode amplifikasi DNA yang digunakan dalam aplikasi biologis molekuler. Ini adalah teknik yang umum digunakan yang membuat jutaan orang menjadi miliaran salinan dari urutan DNA yang sangat tertarik. Ini adalah sebuah in vitro Metode dilakukan di laboratorium. Teknik PCR benar -benar tergantung pada DNA polimerase yang diproduksi secara komersial yang disebut Taq Polymerase. Dan juga membutuhkan beberapa komponen lain dan pemeliharaan suhu yang tepat. Salah satu komponen penting adalah primer. Primer adalah urutan DNA pendek yang dirancang khusus untuk urutan DNA target. Mereka biasanya sekitar 20 nukleotida panjangnya. Taq polimerase mengkatalisasi penambahan nukleotida ke dalam urutan nukleotida yang sudah ada sebelumnya. Oleh karena itu, primer berfungsi sebagai titik awal sintesis untaian baru. Taq polimerase hanya bekerja dalam arah 5 'hingga 3' sehingga sintesis DNA terjadi dalam arah 5 'hingga 3' yang sama. Karena DNA terdampar ganda, dua jenis primer diperlukan dalam PCR. Mereka dikenal sebagai primer maju dan primer terbalik. Primer maju dan terbalik disebut berdasarkan arah perpanjangan primer dalam DNA ketika sintesis DNA terjadi. Forward Primer Anneals dengan Strand DNA antisense dan memulai sintesis untai +ve gen ke arah 5 'hingga 3'. Membalikkan analisis primer dengan untai indera dan memulai sintesis untaian komplementer dari untai pengkodean; yang merupakan untaian gen ke arah 5'to 3 '. Ini adalah perbedaan utama antara primer maju dan terbalik.
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu primer maju
3. Apa itu primer terbalik
4. Kesamaan antara primer maju dan terbalik
5. Perbandingan Berdampingan - Maju vs Reverse Primer dalam Bentuk Tabel
6. Ringkasan
Orientasi ke depan adalah sintesis untai pengkodean atau untaian indera gen. Taq polimerase mengkatalisasi sintesis untai baru dalam arah 5 'hingga 3'. Sintesis untaian pengkodean terjadi ketika primer dialihkan dengan nonkode atau untai antisense dan memanjang dalam arah 5 'hingga 3'.
Gambar 01: Primer Maju dan Terbalik
Primer yang dianek dengan untai antisense atau untai nonkode atau untai templat dikenal sebagai primer maju karena primer maju bertindak sebagai titik awal untuk sintesis pengkodean atau untai positif gene tersebut. Forward Primer memiliki urutan nukleotida pendek yang melengkapi ujung 3 'mengapit untai antisense. Ini hibridisasi dengan untai antisense dan memfasilitasi Taq polimerase untuk menambahkan nukleotida yang melengkapi untai templat.
Reverse Primer adalah urutan DNA pendek yang dialihkan dengan ujung 3 'dari untai indera atau untai pengkodean. Reverse Primer berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis untaian komplementer dari urutan pengkodean atau urutan nonkode. Reverse Primer dirancang komplementer ke ujung 3 'untai pengkodean. Oleh karena itu, ia diulang dengan ujung 3 'ujung untai pengkodean dan memungkinkan Taq polimerase untuk mensintesis untai antisense atau untai templat. Karena orientasinya secara terbalik, primer ini diberi label sebagai primer terbalik.
Baik primer terbalik dan maju penting untuk produksi jutaan hingga miliaran salinan daerah DNA tertentu yang ditargetkan atau tertarik.
Primer Primer Vs Maju | |
Forward Primer adalah urutan DNA pendek yang hibridisasi dengan ujung 3 'noncoding atau untai templat gen dan berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan pengkodean. | Reverse Primer adalah urutan DNA pendek yang hibridisasi dengan ujung 3 'dari pengkodean atau untai nontemplate dan berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan nonkode. |
Annealing Strand | |
Forward Primer Anneals dengan Template Strand. | Terbalik anil primer dengan untai nontemplate. |
Menghasilkan urutan baru | |
Forward Primer memfasilitasi sintesis urutan pengkodean. | Reverse Primer memfasilitasi sintesis urutan nonkode. |
Ada dua jenis primer yang terlibat dalam teknik PCR. Mereka maju dan membalikkan primer. Berdasarkan perpanjangan primer dalam sintesis untai DNA baru, primer ini diberi label atau dinamai. Taq polimerase mensintesis DNA baru dalam orientasi 5 'hingga 3'. Oleh karena itu, primer dirancang sebagai pelengkap ke ujung 3 'untai ganda. Primer maju yang memanjang dalam arah 5 'hingga 3' hibridisasi dengan ujung 3 'antisense atau templat atau urutan nonkode. Itu berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan pengkodean. Membalikkan primer yang memanjang dalam arah 5 'hingga 3' hibridisasi dengan ujung 3 'dari pengkodean atau nontemplate atau untai indera. Itu berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan nonkode. Ini adalah perbedaan antara primer maju dan terbalik.
1.“Primer (biologi molekuler).”Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20 Feb. 2018. Tersedia disini
2.“Reaksi Rantai Polimerase (PCR).”Khan Academy. Tersedia disini
1.'Primer RevComp Melted2'by Richard Wheeler (Zephyris) - karya sendiri, (CC BY -SA 3.0) Via Commons Wikimedia