Perbedaan antara nitroselulosa dan PVDF
Perbedaan utama - nitroselulosa vs PVDF
Western blotting adalah metode yang memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein spesifik dari sampel protein. Keandalan teknik tergantung pada pemilihan membran yang benar untuk penyerapan protein dari gel. Ada berbagai jenis membran mikro. Membran nitroselulosa dan PVDF adalah dua membran yang lebih disukai oleh para peneliti karena atribut khusus mereka daripada jenis membran lainnya. Seleksi antara nitroselulosa atau PVDF juga merupakan tantangan lain di Western blotting. Baik nitroselulosa dan PVDF memiliki kapasitas penyerapan protein tinggi. Perbedaan utama antara nitroselulosa dan membran PVDF adalah bahwa Membran nitroselulosa tidak memiliki kemampuan untuk menghapus antibodi dan menggunakan kembali membran untuk penindasan antibodi sementara membran PVDF memiliki kemampuan pengupasan dan penggunaan kembali.
ISI
1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu nitroselulosa
3. Apa itu PVDF
4. Perbandingan berdampingan - nitroselulosa vs PVDF
5. Ringkasan
Apa itu nitroselulosa?
Nitroselulosa adalah polimer yang diproduksi dengan mengobati selulosa dengan asam nitrat dan digunakan untuk membuat membran mikroporous dalam biologi molekuler, terutama untuk teknik blotting seperti selatan, utara dan barat blotting. Ukuran pori membran nitroselulosa berkisar dari 3 hingga 20 μm. Membran mikropor nitroselulosa memfasilitasi deteksi reaksi imunokimia yang terjadi pada permukaan membran. Oleh karena itu, membran nitroselulosa sering digunakan untuk imobilisasi protein dan deteksi protein spesifik di western blotting. Membran nitroselulosa juga dapat melumpuhkan glikoprotein dan asam nukleat.
Membran nitroselulosa lebih disukai dalam uji aliran lateral karena beberapa fitur. Membran nitroselulosa menyerap protein pada konsentrasi tinggi. Pelarut yang digunakan untuk membasahi membran tidak mengurangi penyerapan protein membran nitroselulosa. Membran nitroselulosa dapat dengan mudah dipotong dengan ukuran gel yang diinginkan dan transfer protein dari gel ke membran dengan transfer listrik atau kapiler. Nitroselulosa memungkinkan aliran protein yang lebih cepat melalui membran dengan potensi pengikatan yang tinggi. Nitroselulosa menunjukkan kekuatan penanganan yang lebih baik. Atribut khusus lain dari membran nitroselulosa adalah dapat dengan mudah dilem dengan perekat tahan air non-pelarut ke berbagai backing plastik.
Gambar 01: membran nitroselulosa untuk western blotting
Apa itu PVDF?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) adalah fluoropolimer yang diproduksi oleh polimerisasi vinylidene difluoride dan memiliki kemampuan imobilisasi protein yang tinggi. Oleh karena itu, membran mikroporous yang terbuat dari PVDF digunakan dalam teknik blotting barat untuk menganalisis protein spesifik dari campuran protein. Membran PVDF juga dapat digunakan untuk analisis asam amino dan sekuensing protein. Karakteristik terpenting dari membran PVDF di atas membran nitroselulosa adalah bahwa hal itu dapat dengan mudah dilucuti dari antibodi dan digunakan kembali untuk probe antibodi berikutnya.
Membran PVDF lebih tebal dari membran nitroselulosa; Oleh karena itu, lebih tahan terhadap kerusakan selama penggunaan kembali. Membran PVDF sangat hidrofobik. Oleh karena itu, mereka harus direndam dalam metanol atau isopropanol sebelum digunakan.
Apa perbedaan antara nitroselulosa dan PVDF?
Nitroselulosa vs PVDF | |
| Nitroselulosa adalah polimer yang terdiri dari selulosa. | PVDF adalah fluoropolimer yang diproduksi oleh polimerisasi vinilidene difluoride. |
| Ukuran pori membran | |
| Ukuran pori khas adalah 0.1, 0.2 atau 0.45μ | Ukuran pori khas adalah 0.1, 0.2 atau 0.45μm |
| Kapasitas pengikatan protein | |
| Nitroselulosa memiliki kapasitas pengikatan protein 80 hingga 100 μg/cm2. | PVDF memiliki kapasitas pengikatan protein 170 hingga 200 μg/cm2. |
| Kepekaan | |
| Ini memiliki sensitivitas rendah dibandingkan dengan PVDF. | Ini memiliki sensitivitas tinggi. |
| Deteksi protein yang diekspresikan rendah | |
| Karena sensitivitasnya rendah pada membran nitroselulosa, tidak cocok untuk mendeteksi protein yang diekspresikan rendah. | Ini lebih cocok untuk deteksi protein yang diekspresikan rendah karena sensitivitasnya yang tinggi. |
| Kebisingan latar belakang | |
| Ini memiliki kebisingan latar belakang yang lebih rendah | Ini memiliki kebisingan latar belakang yang lebih tinggi. |
| Interaksi dengan protein | |
| Molekul protein berikatan dengan membran nitroselulosa melalui interaksi hidrofobik. | Protein berikatan dengan membran PVDF melalui interaksi hidrofobik dan dipol. |
| Sifat membran | |
| Nitroselulosa rapuh dan rapuh. Namun, versi nitroselulosa tersedia, dan mereka tahan. | PVDF lebih tahan lama dan memiliki ketahanan kimia yang lebih tinggi. |
| Kemampuan untuk menelanjangi dan menggunakan kembali | |
| Nitroselulosa mungkin mengalami kesulitan dalam pengupasan dan reprobing tanpa kehilangan sinyal. | PVDF sangat ideal untuk menindas dan mengurutkan aplikasi. |
| Kesesuaian | |
| Nitroselulosa sangat ideal untuk mendeteksi protein dengan berat molekul rendah. | PVDF lebih cocok untuk mendeteksi protein dengan berat molekul yang lebih tinggi. |
| Penggunaan lainnya | |
| Nitroselulosa dapat digunakan untuk analisis asam nukleat dan dot/slot blotting. | PVDF dapat digunakan untuk sekuensing protein dan sistem uji fase padat. |
| Biaya | |
| Ini lebih murah daripada membran PVDF. | Ini lebih mahal daripada membran nitroselulosa. |
| Perlu pra-pembasahan | |
| Membran nitroselulosa tidak memerlukan presoaking dengan metanol | Membran PVDF memerlukan presoaking dengan metanol. |
Ringkasan -nitroselulosa vs PVDF
Membran nitroselulosa adalah membran pertama yang digunakan secara komersial untuk uji aliran lateral. Mereka memiliki kapasitas tinggi untuk menyerap protein. Oleh karena itu, membran nitroselulosa digunakan di Western blotting. PVDF adalah jenis membran lain yang digunakan dalam blotting barat dan juga memiliki kapasitas penyerapan protein tinggi. Kedua jenis digunakan dalam western blotting untuk analisis protein. Namun, membran PVDF memiliki atribut yang lebih khusus, membuatnya lebih cocok daripada membran nitroselulosa untuk western blotting. Tapi, membran nitroselulosa lebih cocok untuk mendeteksi protein berbobot molekul rendah, membran PVDF lebih cocok untuk mendeteksi protein berbobot molekul tinggi. Ini adalah perbedaan antara membran nitroselulosa dan PVDF.
Gambar milik:
1."Western blot Transfer" oleh Bensaccount at English Wikipedia (CC oleh 3.0) Via Commons Wikimedia
Referensi:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge zhou, tung-tien sun, dan thomas a. Neubert. “Penggunaan membran nitroselulosa untuk karakterisasi protein oleh desorpsi laser/spektrometri massa ionisasi yang dibantu matriks." Kimia Analisis. U.S. Perpustakaan Kedokteran Nasional, 15 Juli 2006. Web. 28 Mar. 2017
2."Penanda molekuler dan bioteknologi tanaman." Buku Google. N.P., N.D. Web. 28 Mar. 2017
3.Senin, 8 April 2013 Tweet. “The Magic's in the Bighane: Pilih dengan bijak untuk hasil Best Western blot.“BioCompare. N.P., 08 Apr. 2013. Web. 28 Mar. 2017
