Perbedaan antara halaman SDS dan halaman asli

Perbedaan Utama - Halaman SDS vs asli Halaman
 

SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamida yang digunakan dalam biologi molekuler. Itu perbedaan utama Antara halaman SDS dan halaman asli adalah jenis gel poliakrilamida yang digunakan. Oleh karena itu, di halaman SDS, gel denaturasi digunakan, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, di halaman asli, gel yang tidak berdenaturasi digunakan. Oleh karena itu, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, muatan dan bentuknya.

Elektroforesis gel poliakrilamida (Page) menggunakan gel yang dibuat dengan memolimerisasi monomer akrilamida dengan metilen bisakrilamida. Poliakrilamida lebih tangguh dan lebih stabil dari agarosa. Gel poliakrilamid memiliki ukuran pori yang lebih kecil yang memungkinkan pemisahan protein yang efisien. Ada dua jenis utama pengaturan halaman yaitu halaman SDS dan halaman asli. Halaman SDS atau Elektroforesis gel natrium-dodecyl sulfate polyacrylamide gel memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel denaturasi digunakan di halaman SDS. Halaman asli menggunakan gel yang tidak mendenaturasi dan memisahkan protein berdasarkan ukurannya, muatan, dan bentuknya (konformasi 3D).

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu halaman SDS
3. Apa itu halaman asli
4. Kesamaan antara halaman SDS dan halaman asli
5. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Halaman Asli dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa itu halaman SDS?

Halaman SDS adalah teknik elektroforetik yang paling umum digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel dibuat dengan menambahkan SDS (natrium dodecyl sulfate), yang merupakan deterjen. SDS gigi tiruan protein menjadi monomer. SDS adalah deterjen anionik. Oleh karena itu, ia menambahkan muatan negatif bersih ke protein dalam kisaran pH yang luas. Ketika muatan negatif bersih diberikan pada molekul protein, karena variasi muatan, struktur kompleks dipecah. Karena muatan negatif, protein menarik ke arah akhir yang positif. Dengan demikian molekul dengan perjalanan dengan berat molekul yang lebih rendah lebih cepat pada matriks gel dan dapat diamati dekat dengan anoda, sedangkan protein berat molekul yang lebih tinggi diamati lebih dekat ke sumur.

Gambar 01: Halaman SDS

SDS yang mengikat rantai polipeptida sebanding dengan massa molekul relatifnya. Oleh karena itu, massa molekul juga dapat ditentukan melalui halaman SDS. Pewarnaan gel halaman SDS dilakukan dengan pewarnaan Bromophenol Blue. Aplikasi rentang halaman SDS ke tingkat yang lebih besar di mana dapat digunakan untuk memperkirakan massa molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga dapat digunakan untuk menentukan distribusi protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga diterapkan untuk memurnikan dan menilai protein. Ini digunakan sebagai prosedur awal untuk blotting dan hibridisasi barat, yang pada gilirannya digunakan untuk pemetaan dan identifikasi protein.

Apa itu halaman asli?

Elektroforesis gel poliakrilamida asli (halaman asli) menggunakan gel yang tidak mendenaturasi. Oleh karena itu, SDS atau agen denaturasi lainnya tidak ditambahkan ke matriks gel. Di halaman asli, pemisahan protein didasarkan pada muatan dan ukuran protein. Oleh karena itu, mobilitas protein tergantung pada muatan dan ukuran protein.

Muatan protein tergantung pada rantai samping asam amino. Jika rantai samping bermuatan negatif, protein akan menerima muatan negatif keseluruhan dan sebaliknya. Protein mempertahankan konformasi 3D karena lipatan yang terjadi. Hasil lipat dari beberapa jenis ikatan dalam protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen. Oleh karena itu, jika halaman asli dilakukan pada pH netral, protein akan dipisahkan sesuai dengan bentuk molekul protein. Oleh karena itu, halaman asli dapat digunakan sebagai teknik sensitif untuk mendeteksi perubahan muatan atau konformasi protein.

Keuntungan utama dari halaman asli adalah bahwa protein yang digunakan untuk analisis halaman dapat dipulihkan dalam keadaan semula setelah analisis halaman, karena protein tidak terganggu selama proses. Halaman asli adalah teknik throughput yang relatif tinggi, dan stabilitas protein meningkat.

Gambar 02: Halaman Asli

Setelah selesai menjalankan gel, gel halaman asli dapat dilihat dengan pewarnaan dengan bromophenol blue atau reagen pewarnaan lainnya. Aplikasi halaman asli termasuk pemisahan protein asam termasuk glikoprotein seperti erythropoietin rekombinan manusia atau identifikasi protein yang ada dalam albumin serum sapi (BSA).

Apa kesamaan antara halaman SDS dan halaman asli?

• Halaman SDS dan sistem halaman asli menggunakan gel poliakrilamida sebagai matriks gel.
• Keduanya digunakan untuk pemisahan dan identifikasi protein.
• Keduanya menggunakan mobilitas elektroforesis untuk memisahkan senyawa.
• Keduanya dapat dilakukan dengan cara vertikal atau horizontal (sebagian besar dilakukan sebagai pengaturan halaman vertikal karena panjang run lebih banyak).
• Peralatan elektroforesis termasuk tangki gel, sisir, catu daya diperlukan untuk pengoperasian kedua teknik.
• Visualisasi gel dapat dilakukan dengan metode pewarnaan di kedua teknik.

Apa perbedaan antara halaman SDS dan halaman asli?

Ringkasan - Halaman SDS vs asli Halaman

Halaman SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamida yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS diperlakukan dengan deterjen yang disebut SDS. SDS memberikan muatan negatif keseluruhan ke protein, yang kemudian menghasilkan denaturasi protein. Oleh karena itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, teknik halaman asli tidak menggunakan agen denaturasi apa pun. Dengan demikian protein dipisahkan berdasarkan ukurannya atau bentuknya. Inilah perbedaan antara halaman SDS dan halaman asli.

Referensi:

1.“Prinsip dan metode elektroforesis gel poliakrilamida (SDS-PAGE).”Prinsip dan metode elektroforesis gel poliakrilamida (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -Asia-. Tersedia disini
2.“Gel asli.”Aliansi Protein Laboratorium | Layanan Karakterisasi Biofisika. Tersedia disini  

Gambar milik:

1.'SDS-PAGE ELECTROPHORESIS'BY BENSACCOUNT DI Bahasa Inggris Wikipedia, (CC oleh 3.0) Via Commons Wikimedia  
2.'Muat sampel ke dalam elektroforesis gel poliakrilamida well'by blaz nemec dari ljubljana, slovenia (cc by-sa 2.0) Via Commons Wikimedia