Perbedaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom

Perbedaan Kunci - Lapisan Kertas vs Vs Vs Kolom Kromatografi
 

Kromatografi kertas, kromatografi lapisan tipis, dan kromatografi kolom adalah tiga jenis teknik kromatografi. Itu perbedaan utama Antara kromatografi kertas, kromatografi lapisan tipis dan kromatografi kolom didasarkan pada jenis fase stasioner yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam, kromatografi lapisan tipis menggunakan alumina atau gel silika sebagai fase diam, sedangkan kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fase stasionernya.

Dalam proses pemisahan dan identifikasi biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi adalah teknik biofisik penting yang digunakan. Kromatografi memisahkan senyawa berdasarkan kelarutan, ukuran, dan muatannya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, partisi dan eksklusi ukuran dan ada tiga teknik kromatografi; yaitu, kertas, lapisan tipis, dan kromatografi kolom. Kromatografi kertas didasarkan pada adsorpsi padat-cair dan kelarutan senyawa, dan menggunakan kertas selulosa sebagai fase stasioner. Kromatografi lapisan tipis didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair molekul. Ini memiliki fase stasioner yang biasanya terbuat dari alumina atau gel silika dan fase gerak yang merupakan pelarut. Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas atau muatannya.

ISI

1. Tinjauan Kromatografi dan Perbedaan Utama
2. Apa itu kromatografi kertas
3. Apa itu kromatografi lapisan tipis
4. Apa itu kromatografi kolom
5. Kesamaan antara kertas, lapisan tipis dan kromatografi kolom
6. Perbandingan berdampingan - kertas vs lapisan tipis vs kromatografi kolom dalam bentuk tabel
7. Ringkasan

Apa itu kromatografi kertas?

Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi paling sederhana yang digunakan, dan tidak digunakan untuk penelitian yang luas. Ini terutama digunakan di laboratorium mahasiswa untuk mengidentifikasi biomolekul seperti asam amino dan karbohidrat yang ada dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fase stasioner yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas filter whatman dan fase gerak yang biasanya disiapkan menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fase stasioner jenuh dengan air, membuat fase stasioner cairan. Dengan demikian, ketika senyawa terlihat dan dibiarkan berjalan di hadapan fase gerak, tergantung pada kelarutan senyawa, mereka dipisahkan. Dengan demikian, setelah pengembangan kromatogram, pewarnaan dapat dilakukan untuk menentukan menjalankan panjang masing -masing senyawa. Faktor retensi dengan demikian dapat dihitung.

Gambar 01: Kromatografi kertas

Kromatografi kertas dapat diklasifikasikan lebih lanjut sebagai kromatografi kertas ascending dan kromatografi kertas menurun tergantung pada arah pelarut yang berjalan.

Apa itu kromatografi lapisan tipis?

Kromatografi lapisan tipis atau TLC adalah teknik yang umum digunakan untuk mengidentifikasi berbagai asam amino yang ada dalam campuran atau untuk identifikasi protein. Teknik pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. Selama kromatografi lapisan tipis, pelat yang terbuat dari alumina atau gel silika digunakan sebagai fase diam. Campuran pelarut bervariasi berdasarkan kebutuhan dan dapat menggunakan kombinasi senyawa organik yang berbeda seperti N-butanol, asam asetat, dan air untuk menyiapkan pelarut. Senyawa yang akan dipisahkan terlihat di piring dan direndam dalam campuran pelarut. Setelah pelarut bergerak ke atas berdasarkan aksi kapiler yang diberikan oleh pelat, senyawa yang terlihat di pelat juga bergerak tergantung pada kelarutannya dalam pelarut.

Gambar 02: Kromatografi lapisan tipis

Deteksi bintik -bintik setelah kromatogram dijalankan dengan prosedur pewarnaan yang berbeda. Beberapa menggunakan pewarnaan ninhydrin yang cukup merupakan metode pewarnaan beracun. Kromatogram lapisan tipis modern menggunakan teknik fluoresensi untuk melihat kromatogram setelah lari. Tergantung pada jarak yang telah ditempuhnya, waktu retensi masing -masing senyawa dapat dihitung. Ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis senyawa yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC terutama digunakan untuk mengidentifikasi asam amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan berbagai jenis monosakarida yang ada dalam campuran.

Apa itu kromatografi kolom?

Kromatografi kolom adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan banyak jenis teknik kromatografi yang menggunakan metode pemisahan berbasis kolom. Dalam kromatografi kolom, kolom fisik digunakan dengan bahan pengemasan untuk memisahkan senyawa. Pemisahan mungkin didasarkan pada sifat fisik yang berbeda yang ditunjukkan oleh senyawa. Properti ini dapat berupa muatan, ukuran, konformasi 3D dan kapasitas pengikatan, dll. Dengan demikian, kolom yang dikemas dengan materi matriks bertindak sebagai fase stasioner dan buffer cuci yang diterapkan pada kolom bertindak sebagai fase gerak.

Jika molekul dipisahkan berdasarkan ukurannya, bahan pengemasan dikemas dengan cara yang meninggalkan pori -pori untuk senyawa untuk dilalui. Dengan demikian, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui pori -pori dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul yang lebih kecil membutuhkan waktu lebih lama untuk dielusi.

Gambar 03: Kromatografi kolom

Jika molekul dipisahkan berdasarkan muatannya, fase stasioner akan berisi penukar anion atau kation yang akan tertarik pada muatannya berdasarkan muatannya. Jadi selama langkah pencucian, senyawa yang tidak terikat akan dielusi. Setelah menambahkan penyangga elusi, senyawa yang diikat akan dielusi. Deteksi eluen ini sebagian besar didasarkan pada teknik spektrofotometri.

Apa kesamaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom?

• Semua kromatografi lapisan tipis kertas dan kolom tiga teknik digunakan untuk pemisahan biomolekul seperti asam amino, protein dan karbohidrat.
• Lapisan tipis kertas dan teknik kromatografi kolom memiliki fase gerak dan fase stasioner.
• Lapisan tipis kertas dan teknik kromatografi kolom menggunakan mekanisme biofisik untuk pemisahan.

Apa perbedaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom?

Ringkasan - Lapisan tipis kertas vs Kolom Kromatografi

Kromatografi kertas, TLC dan kromatografi kolom adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asam amino dan karbohidrat (terutama monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam, dan mekanisme pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. TLC juga menggunakan mekanisme adsorpsi solid-cair. Molekul dipisahkan pada fase stasioner, tergantung pada kelarutannya dalam fase gerak. Kromatografi kolom menggunakan sifat fisik seperti ukuran, bentuk, muatan dan berat molekul senyawa untuk memisahkan. Kolom yang dikemas dengan materi matriks bertindak sebagai fase diam, sedangkan buffer cuci bertindak sebagai fase pelarut. Inilah perbedaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom.

Referensi:

1.Clark, Jim. “Kromatografi lapisan tipis.”Kromatografi Lapisan Tipis, 2007. Tersedia disini 
2.Coskun, Ozlem. “Teknik Pemisahan: Kromatografi.”Klinik Utara Istanbul, Kare Publishing, 2016. Tersedia disini 

Gambar milik:

1.'Tangki Kromatografi' (CC BY-SA 3.0) Via Commons Wikimedia  
2.'TLC Sequence'by Quantockgoblin, (domain publik) via commons wikimedia
3.'Kromatografi kolom' (domain publik) via commons wikimedia