Perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung

Itu perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah bahwa Imunofluoresensi langsung menggunakan antibodi tunggal yang bekerja melawan target yang menarik sementara imunofluoresensi tidak langsung menggunakan dua antibodi untuk memberi label target yang menarik.

Imunofluoresensi atau pencitraan sel adalah teknik yang digunakan untuk memberi label antigen target spesifik dengan fluorofor. Di sini, fluorofor adalah senyawa kimia fluorescent yang dapat memancarkan kembali cahaya pada eksitasi cahaya. Ketika fluorophore berikatan dengan antigen target, memungkinkan deteksi molekul target dalam sampel. Untuk menggambarkannya lebih lanjut, ketika antigen mengikat dengan antibodi spesifik, itu dapat dikonjugasikan dengan fluorofor. Oleh karena itu, mudah untuk mendeteksi keberadaan antigen target dalam sampel saat mengamati di bawah mikroskop fluoresensi.

Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi; imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung terutama terletak pada jumlah antibodi yang digunakan dan konjugasi fluorofor. Yaitu, dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor secara langsung terkonjugasi ke antibodi primer saat dalam imunofluoresensi tidak langsung, konjugasi fluorofor dengan antibodi sekunder.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu imunofluoresensi langsung
3. Apa itu imunofluoresensi tidak langsung
4. Kesamaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung
5. Perbandingan berdampingan - imunofluoresensi tidak langsung vs langsung dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa itu imunofluoresensi langsung?

Imunofluoresensi menggunakan antibodi untuk mendeteksi antigen target tertentu. Imunofluoresensi langsung adalah salah satu dari dua jenis imunofluoresensi. Dalam imunofluoresensi langsung, antibodi tunggal (antibodi primer) melibatkan dan fluorofor secara langsung terkonjugasi dengan antibodi primer. Setelah mengikat antibodi dengan antigen target, fluorofor memancarkan fluoresensi yang dapat dideteksi dengan mikroskop fluoresensi.

Gambar 01: Imunofluoresensi langsung

Namun, imunofluoresensi langsung adalah metode yang mahal karena antibodi terkonjugasi primer mahal dibandingkan dengan antibodi sekunder. Namun demikian, itu tidak melibatkan langkah tambahan karena itu, teknik yang lebih pendek. Selanjutnya, binding non-spesifik berkurang dalam imunofluoresensi langsung. Oleh karena itu, spesies reaktivitas silang rendah. Tetapi dalam deteksi, sensitivitas imunofluoresensi langsung lemah dibandingkan dengan imunofluoresensi tidak langsung .

Apa itu imunofluoresensi tidak langsung?

Imunofluoresensi tidak langsung adalah tipe kedua dari imunofluoresensi yang melibatkan dua jenis antibodi seperti antibodi primer dan sekunder dalam pelabelan antigen target. Dalam metode ini, fluorofor konjugat dengan antibodi sekunder. Oleh karena itu, teknik ini melibatkan langkah tambahan.

Gambar 02: imunofluoresensi

Namun, sensitivitasnya tinggi dalam metode ini karena beberapa fluorofor dapat dikonjugasikan ke antibodi sekunder dan membuat deteksi lebih mudah. Selain itu, imunofluoresensi tidak langsung lebih murah karena fakta bahwa konjugasi antibodi sekunder lebih murah dan lebih mudah. Dibandingkan dengan imunofluoresensi langsung, spesies-reaktivitas silang tinggi dalam metode tidak langsung.

Apa kesamaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung?

• Mereka adalah dua jenis teknik imunofluoresensi.
• Antibodi primer dan fluorofor terlibat dalam kedua metode.
• Juga, reaksi antibodi antigen terjadi di kedua metode.
• Selain itu, baik imunofluoresensi langsung dan tidak langsung menggunakan mikroskop fluoresensi untuk mendeteksi antigen.

Apa perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung?

Imunofluoresensi dapat langsung atau tidak langsung berdasarkan konjugasi fluorofor dengan antibodi yang digunakan. Dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor konjugat dengan antibodi primer, yang merupakan antibodi tunggal yang melibatkan dalam teknik ini. Berbeda dengan itu, dalam imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor konjugat dengan antibodi sekunder, yang merupakan salah satu dari dua jenis antibodi yang melibatkan dalam teknik ini. Oleh karena itu, perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah tipe antibodi yang berkonjugasi dengan fluorofor.

Infografis berikut memberikan perbandingan berdampingan dari perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.

Ringkasan -Immunofluoresensi Tidak Langsung Vs

Imunofluoresensi adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen spesifik dalam sampel. Teknik ini menggunakan antibodi spesifik. Oleh karena itu, dalam hal ini, antibodi konjugasi dengan fluorofor untuk mendeteksinya menggunakan mikroskop fluoresen. Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi yaitu imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Imunofluoresensi langsung melibatkan antibodi tunggal dan fluorofor yang secara langsung terkonjugasi dengan antibodi ini. Imunofluoresensi tidak langsung melibatkan dua antibodi; Primer dan sekunder dan fluorofor terkonjugasi ke antibodi sekunder. Karena beberapa antibodi sekunder dapat mengikat dengan antibodi primer dan beberapa fluorofor dapat konjugasi dengan antibodi sekunder, imunofluoresensi tidak langsung adalah metode yang lebih sensitif daripada metode langsung. Selain itu, metode tidak langsung lebih murah daripada metode langsung. Dengan demikian, ini adalah perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.

Referensi:

1.“Imunofluoresensi.”Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 Agustus. 2018. Tersedia disini 

Gambar milik:

1."HSP If IgA" oleh Emmanuelm di EN.Wikipedia, (CC oleh 3.0) Via Commons Wikimedia
2."Immunofluorescence" oleh Westhayl618 - karya sendiri, (CC BY -SA 4.0) Via Commons Wikimedia