Perbedaan antara trypsinization hangat dan dingin

Perbedaan utama - VS hangat Dingin TRYPSINISASI
 

Trypsinization hangat dan dingin adalah dua metode yang digunakan dalam disagregasi enzimatik sel dalam kultur sel hewan. Itu perbedaan utama Antara trypsinization hangat dan dingin, seperti namanya, tergantung pada suhu di mana trypsin ditambahkan untuk disagregasi seluler. Trypsinization hangat terjadi dalam kondisi suhu yang lebih tinggi (36.5 - 37 ⁰C) Sedangkan trypsinization dingin terjadi dalam kondisi suhu rendah.

Selama proses pembiakan sel primer sel hewan, ada tiga metode utama yang digunakan dan telah terbukti berhasil. Tiga metode ini meliputi disagregasi mekanis sel, disagregasi enzimatik sel dan teknik eksplan utama. Disagregasi enzimatik sel yang mengarah ke isolasi sel dan dilakukan oleh enzim trypsin yang mendegradasi protein. Oleh karena itu, proses ini dikenal sebagai trypsinization. TRYPSINISASI dapat dilakukan dalam dua kondisi berbeda yaitu trypsinization hangat dan trypsinization dingin. Trypsinization hangat adalah metode memperlakukan sel dengan trypsin dalam kondisi hangat pada suhu 36.5 - 37 ⁰C. Trypsinization dingin adalah proses perawatan trypsin yang terjadi dalam kondisi yang lebih dingin lebih disukai dalam es mempertahankan suhu yang sangat rendah.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu trespinisasi hangat
3. Apa itu tripssinisasi dingin
4. Kesamaan antara trypsinization hangat dan dingin
5. Perbandingan berdampingan - trypsinization hangat vs dingin dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa itu trespinisasi hangat?

Trippinisasi dapat dilakukan untuk memisahkan komponen seluler untuk mengisolasi sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Trypsin adalah enzim degradasi protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam trypsinization dapat berupa ekstrak kasar atau produk yang dimurnikan. Ekstrak kasar dikatakan lebih efisien dalam lisis protein dan disintegrasi sel karena mengandung enzim degradatif lainnya.

Trypsinization hangat adalah metode enzimatik yang paling umum digunakan untuk disagregasi sel yang terjadi dalam kondisi suhu yang lebih tinggi. Sebelum perawatan dengan trypsinization, jaringan yang diinginkan dipotong menjadi potongan -potongan kecil. Itu memfasilitasi proses disagregasi yang mudah. Jaringan cincang kemudian dicuci dalam media khusus yang dikenal sebagai media garam basal diseksi.

Setelah menyelesaikan langkah pencucian, sel -sel diubah menjadi labu yang mengandung enzim aktif, yang merupakan trypsin. Karena teknik ini menyiratkan protokol trypsinization hangat, trypsin ditempatkan pada suhu sekitar 37 ⁰C selama sekitar empat jam.

Gambar 01: trypsin

Isi dicampur dan diaduk dengan menggunakan metode sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan untuk mempercepat proses disagregasi. Setelah waktu yang disarankan tercapai, sel -sel dapat diturunkan dari supernatan. Sel -sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu.

Apa itu tripssinisasi dingin?

Trypsinization dingin adalah jenis trypsinization lainnya yang terjadi dalam kondisi dingin. Dalam teknik ini, sel -sel yang dipotong dan dicuci ditempatkan dalam botol di atas es dan kemudian direndam dengan trypsin. Periode perendaman lebih lama - sekitar 6 - 24 jam.

Setelah menyelesaikan prosedur perendaman, trypsin dikeluarkan dari sel lisat, dan potongan jaringan diinkubasi lebih lanjut pada 37 ⁰C selama sekitar 20 - 30 menit. Disagregasi sel disebabkan oleh pemipaan berulang dari campuran jaringan. Ini akan memungkinkan sel untuk memisahkan dari membran dan datang ke supernatan. Setelah sel berada di supernatan, mereka diinkubasi dan ditanam pada suhu dan periode waktu yang diinginkan.

Metode tripsinisasi dingin memiliki beberapa keunggulan

• Hasil sel yang lebih tinggi karena kerusakan sel diminimalkan. Kerusakan sel diminimalkan dengan tidak menggunakan langkah sentrifugasi.
• Metode yang sangat nyaman.
• Kurang melelahkan.

Keterbatasan utama dari metode trypsinization dingin adalah bahwa jumlah besar tidak dapat digunakan dalam satu contoh.

Apa kesamaan antara trypsinization hangat dan dingin?

• Proses trypsinization yang hangat dan dingin menggunakan trypsin enzim untuk disagregasi sel.
• Proses trypsinization hangat dan dingin digunakan dalam prosedur kultur sel untuk disagregasi sel.
• Dalam prosedur perawatan trypsinization yang hangat dan dingin, sel -sel berasal dari supernatan.

Apa perbedaan antara trypsinization hangat dan dingin?

Ringkasan - Hangat vs Dingin TRYPSINISASI

Trypsinization adalah metode menggunakan pryzyme trypsin yang mendegradasi protein untuk disagregasi dan persiapan kultur sel primer selama proses kultur sel. Ada dua teknik utama trypsinization berdasarkan suhu yang digunakan selama prosedur. Mereka tripssinisasi yang hangat dan dingin. TRYPSINISASI Hangat dilakukan pada 37 ⁰C Sedangkan trypsinization dingin dilakukan dalam kondisi sedingin es. Meskipun trypsinization dingin membutuhkan waktu lebih lama untuk selesai, dikatakan memiliki hasil sel yang lebih tinggi. Ini karena fakta bahwa kerusakan sel diminimalkan dalam trypsinization dingin karena tidak menggunakan langkah sentrifugasi yang kuat. Inilah perbedaan antara trypsinization hangat dan dingin.

Referensi:

1.“Trypsinization."Trypsinization - Tinjauan umum | Topik ScienceDirect. Tersedia disini 
2.“Kultur sel primer: 3 teknik (dengan diagram).Diskusi Biologi, 16 Okt. 2015. Tersedia disini  

Gambar milik:

1.'Trypsin Active Site'by Fdardel - karya sendiri, (CC BY -SA 3.0) Via Commons Wikimedia