Apa perbedaan antara tes PCR bersarang dan real-time konvensional

Itu perbedaan utama Antara uji PCR bersarang dan real-time konvensional adalah bahwa PCR konvensional adalah teknik yang dikembangkan untuk memperkuat urutan spesifik DNA dan PCR bersarang adalah modifikasi PCR konvensional yang terdiri dari dua reaksi amplifikasi berurutan, sementara PCR waktu nyata adalah varian PCR konvensional yang mampu mengukur produk yang diamplifikasi.

PCR adalah teknik ilmiah yang sangat umum digunakan dalam penelitian dan obat -obatan untuk mendeteksi DNA. Tes PCR digunakan untuk mendeteksi antigen dengan mendeteksi DNA atau RNA mereka. Secara umum, RNA virus hadir dalam tubuh sebelum mendeteksi antibodi atau menampilkan gejala penyakit. Tes PCR dapat mengetahui apakah seseorang memiliki virus sejak awal atau tidak. Saat ini, PCR adalah tes standar untuk mendeteksi penyakit Covid-19. Ada berbagai jenis teknik PCR seperti PCR real-time, PCR bersarang, PCR multipleks, PCR start panas dan PCR jarak jauh, dll.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa tes PCR konvensional
3. Tes PCR bersarang apa
4. Apa itu tes PCR real-time
5. Kesamaan -Tes PCR bersarang dan real -time konvensional
6. Uji PCR konvensional vs bersarang vs real-time dalam bentuk tabel
7. Ringkasan -Tes PCR konvensional vs bersarang vs real -time

Apa tes PCR konvensional?

Uji PCR konvensional adalah sebuah in vitro Teknik amplifikasi DNA secara rutin dilakukan di laboratorium biologis molekuler. Metode ini memungkinkan produksi ribuan hingga jutaan salinan fragmen DNA tertentu. Kary Mullis memperkenalkan teknik ini pada tahun 1980. Teknik ini membutuhkan fragmen DNA yang dikenal sebagai templat untuk membuat banyak salinannya. Taq polimerase berfungsi sebagai enzim DNA polimerase dan mengkatalisasi sintesis untaian baru dari urutan template.

Primer dalam campuran PCR akan berfungsi sebagai titik awal untuk ekstensi fragmen. Semua bahan yang diperlukan untuk membuat salinan DNA termasuk dalam campuran PCR. Reaksi PCR dijalankan dalam mesin PCR, dan harus diberi makan dengan campuran PCR yang benar dan program PCR yang benar. Jika campuran reaksi dan programnya benar, itu akan menghasilkan jumlah salinan yang diperlukan dari bagian DNA tertentu dari sejumlah kecil DNA.

Gambar 01: Uji PCR konvensional

Ada tiga langkah utama yang terlibat dalam reaksi PCR: denaturasi, anil primer, dan ekstensi untai. Tiga langkah ini terjadi pada tiga suhu yang berbeda. PCR Buffer mempertahankan kondisi optimal untuk aksi TAQ polimerase. Tiga tahap reaksi PCR ini diulangi untuk menghasilkan jumlah produk PCR yang diperlukan. Pada setiap reaksi PCR, jumlah salinan DNA berlipat ganda. Oleh karena itu, amplifikasi eksponensial dapat diamati dalam PCR. Produk PCR dapat diselesaikan dengan menggunakan elektroforesis gel karena menghasilkan jumlah DNA yang terlihat pada gel, dan dapat dimurnikan untuk studi lebih lanjut seperti sekuensing.

PCR adalah alat yang berharga dalam penelitian medis dan biologis. Terutama dalam studi forensik, PCR memiliki nilai yang sangat besar karena dapat memperkuat DNA untuk studi dari sampel kecil para penjahat dan membuat profil DNA forensik. PCR banyak digunakan di banyak bidang biologi molekuler termasuk, genotipe, kloning gen, deteksi mutasi, sekuensing DNA, microarray DNA, dan pengujian ayah.

Tes PCR bersarang apa?

PCR bersarang adalah jenis PCR yang mengurangi amplifikasi DNA yang tidak spesifik. Ada dua PCR berturut -turut atau dua reaksi amplifikasi berurutan dalam uji PCR bersarang. Selama reaksi amplifikasi pertama, produk PCR diproduksi. Setelah reaksi pertama, reaksi amplifikasi kedua dilakukan pada produk PCR dari reaksi pertama. Oleh karena itu, primer dalam campuran reaksi kedua mengikat dengan produk PCR pertama dan memperkuatnya.

Gambar 02: PCR bersarang

Pasangan primer berbeda dalam setiap reaksi. Ikatan primer yang tidak spesifik berkurang pada PCR bersarang. Tes PCR bersarang berguna untuk meningkatkan sensitivitas dan/atau spesifisitas. Namun, PCR bersarang membutuhkan pengetahuan tentang urutan yang berminat.

Apa itu tes PCR real-time?

PCR real-time atau PCR kuantitatif (Q PCR) adalah versi modifikasi PCR yang mengukur produk PCR secara kuantitatif. Oleh karena itu, teknik ini mengukur amplifikasi secara real-time menggunakan mesin PCR real-time. Ini juga merupakan metode yang cocok untuk menentukan jumlah urutan target atau gen yang ada dalam sampel.

Fitur menarik dari PCR real-time adalah menggabungkan baik amplifikasi dan kuantifikasi sejati menjadi satu langkah. Oleh karena itu, kebutuhan akan elektroforesis gel untuk deteksi dapat dihilangkan dengan teknik PCR real-time. Penggunaan pewarna fluorescent untuk memberi label produk PCR selama reaksi PCR pada akhirnya akan menyebabkan kuantifikasi langsung. Ketika produk PCR terakumulasi, sinyal fluoresen juga terakumulasi, dan mereka akan diukur dengan mesin waktu-nyata. Sybr Green dan Taqman adalah dua metode untuk mendeteksi atau menonton proses amplifikasi PCR real-time. Kedua metode memantau kemajuan proses amplifikasi dan melaporkan jumlah produk secara real-time.

Gambar 03: PCR real-time

PCR real-time memiliki berbagai aplikasi seperti kuantifikasi ekspresi gen, microRNA dan analisis RNA non-coding, genotipe SNP, deteksi varian jumlah salinan, deteksi mutasi langka, deteksi organisme yang dimodifikasi secara genetik, dan deteksi agen infeksius.

Apa kesamaan antara tes PCR bersarang dan real-time konvensional?

• Tes PCR bersarang dan real-time adalah modifikasi dari uji PCR konvensional.
• Ketiga teknik memperkuat sampel DNA.
• Produk mereka dapat digunakan dalam pengurutan atau analisis.
• Pengujian ini membutuhkan primer.

Apa perbedaan antara tes PCR bersarang dan real-time konvensional?

PCR konvensional adalah teknik yang dikembangkan untuk memperkuat urutan spesifik DNA. Sementara itu, PCR bersarang adalah modifikasi PCR konvensional yang terdiri dari dua reaksi amplifikasi berurutan, dan PCR waktu-nyata adalah varian PCR konvensional yang mampu mengukur produk yang diperkuat.  Jadi, ini adalah perbedaan utama antara tes PCR bersarang dan real-time konvensional. Tidak seperti PCR konvensional dan real-time, PCR bersarang menggunakan dua set primer. Selain itu, ada dua reaksi amplifikasi berturut-turut dalam PCR bersarang untuk mengurangi amplifikasi non-spesifik. Selain itu, tes PCR konvensional dan real-time tidak mengandung dua reaksi amplifikasi berurutan.

Infografis berikut mencantumkan perbedaan antara tes PCR bersarang dan real-time dalam bentuk tabel untuk perbandingan berdampingan.

Ringkasan -Tes PCR konvensional vs bersarang vs real -time

PCR konvensional adalah teknik pertama yang dikembangkan untuk memperkuat fragmen spesifik DNA. PCR bersarang dan PCR real-time adalah dua varian PCR konvensional. Ada dua reaksi amplifikasi berurutan dan penggunaan dua set primer dalam PCR bersarang. PCR real-time dikembangkan untuk mengukur produk PCR yang diamplifikasi. Dengan demikian, ini merangkum perbedaan antara tes PCR bersarang dan real-time konvensional.

Referensi:

1. Tuan Hijau, Sambrook J. “Nested Polymerase Chain Reaction (PCR).Protokol Cold Spring Harbor, U.S. Perpustakaan Kedokteran Nasional.
2. “Reaksi berantai polimerase real-time."Tinjauan umum | Topik ScienceDirect.

Gambar milik:

1. "Reaksi Rantai Polimerase" oleh Enzoklop - karya sendiri (CC BY -SA 3.0) Via Commons Wikimedia
2. "Nested PCR" oleh Zephyris di Wikipedia berbahasa Inggris (CC BY-SA 3.0) Via Commons Wikimedia
3. "Real Time PCR" oleh İnformatic - karya sendiri (CC BY -SA 3.0) Via Commons Wikimedia