Apa perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik

Itu perbedaan utama Antara uji kolorimetri dan fluorometrik adalah bahwa uji kolorimetri menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan sementara uji fluorometrik menentukan mekanisme kinetik suatu larutan.

Uji biokimia adalah teknik yang mendeteksi atau mengukur aktivitas molekul biologis atau zat secara analitik. Ini adalah sebuah in vitro proses. Uji kolorimetri dan uji fluorometrik adalah dua jenis uji biokimia umum yang dilakukan di laboratorium. Berbagai teknik seperti ELISA dan Western blotting juga merupakan uji biokimia yang kompleks untuk kuantifikasi aktivitas metabolisme dan pengukuran perilaku fungsional biomolekul seperti protein, enzim, dan molekul kecil lainnya. Jenis-jenis pengujian ini digunakan untuk identifikasi protein-DNA, protein-RNA, dan interaksi protein-protein.

ISI

1. Ikhtisar dan Perbedaan Utama
2. Apa itu uji kolorimetri
3. Apa itu uji fluorometrik
4. Kesamaan - uji kolorimetri dan fluorometrik
5. Uji kolorimetri vs fluorometrik dalam bentuk tabel
6. Ringkasan

Apa itu uji kolorimetri?

Uji kolorimetri adalah teknik yang menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan. Dengan kata lain, uji kolorimetri adalah reaksi yang menyebabkan perubahan warna karena reaksi enzimatik atau kimia antara reagen dan analit. Tes kolorimetri dipraktikkan dalam biokimia untuk menguji enzim, senyawa spesifik, hormon, antibodi dan analit lainnya. Mereka menggunakan kolorimeter atau spektrofotometer. Colorimeter adalah instrumen yang menjadi ciri sampel berwarna untuk memberikan ukuran obyektif karakteristik warna. Spektrofotometer adalah perangkat yang mengukur intensitas cahaya sebagai fungsi dari warna atau panjang gelombang cahaya.

Gambar 01: uji kolorimetri

Bagaimana cara kerja uji kolorimetri?

Dalam uji kolorimetri, pelat disiapkan dengan antibodi tertentu yang terikat pada sumur. Kemudian sampel ditambahkan. Ini memungkinkan sampel untuk mengikat antibodi. Kemudian antibodi deteksi dan substrat ditambahkan ke sumur untuk bereaksi dengan probe deteksi. Solusi berhenti ditambahkan di akhir sebelum membaca. Sumur kosong yang disebut kosong dibiarkan tanpa sampel. Dalam uji kolorimetri, semakin gelap warnanya, semakin besar konsentrasi analit. Biasanya, hanya satu panjang gelombang yang diperlukan untuk membaca. Tetapi jika ada pengukuran referensi, dua atau lebih panjang gelombang digunakan.

Apa itu uji fluorometrik?

Uji fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Uji fluorometrik terjadi dengan pembentukan produk fluoresen dari substrat nonfluoresen atau dan sebaliknya. Uji ini juga memanfaatkan transfer energi resonansi fluoresensi (FRET) di mana, reaksi enzimatik mengubah posisi dua fluorofor dalam substrat dengan demikian, mengubah intensitas fluoresensi.

Gambar 02: Uji Fluorometrik

Tes fluorometrik umumnya jauh lebih sensitif daripada tes lainnya. Estimasi enzim diagnostik dalam sampel jaringan, sel, atau cairan pasien meningkat karena sensitivitasnya yang lebih tinggi.

Bagaimana cara kerja uji fluorometrik?

Dalam uji fluorometrik, substrat ditambahkan ke sampel dalam pelat, dan respons fluoresensi diambil menggunakan pembaca pelat. Di sini, setiap sel diukur secara terpisah. Pelat buram digunakan dalam uji fluorometrik. Ini mengurangi hamburan cahaya. Dua panjang gelombang diperlukan untuk jenis pengujian ini. Satu panjang gelombang adalah mendeteksi eksitasi dan panjang gelombang lainnya adalah untuk emisi.

Apa kesamaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik?

• Uji kolorimetri dan uji fluorometrik adalah dua jenis uji biokimia.
• Kedua pengujian dilakukan untuk diagnostik medis.
• Pengujian ini melibatkan reaksi enzimatik.
• Kedua pengujian melibatkan substrat dan analit.

Apa perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik?

Uji kolorimetri adalah teknik yang menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan, sedangkan uji fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Jadi, ini adalah perbedaan utama antara uji kolorimetri dan fluorometrik. Selain itu, tes fluorometrik lebih sensitif daripada uji kolorimetri; Dengan demikian, uji fluorometrik memiliki kemampuan untuk mendeteksi lebih banyak analit. Dengan demikian, ini adalah perbedaan penting lainnya antara uji kolorimetri dan fluorometrik. Selain itu, uji fluorometrik membutuhkan dua panjang gelombang, sedangkan uji kolorimetri dilakukan dengan satu panjang gelombang.

Infografis di bawah ini tabulasi lebih banyak perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik.

Ringkasan -uji kolorimetri vs fluorometrik

Uji biokimia adalah proses analitik yang digunakan untuk menentukan dan mengukur reaksi metabolik seluler. Uji kolorimetri dan uji fluorometrik adalah dua jenis uji biokimia. Uji kolorimetri adalah reaksi yang menyebabkan perubahan warna karena reaksi enzimatik atau kimia antara reagen dan analit sementara uji fluorometrik adalah teknik yang digunakan untuk menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim.  Kedua tes bergantung pada reaksi enzimatik yang melibatkan substrat dan analit. Tes fluorometrik lebih sensitif daripada uji kolorimetri. Yang paling penting, uji fluorometrik membutuhkan dua panjang gelombang, sedangkan uji kolorimetri dapat dilakukan dengan hanya satu panjang gelombang. Dengan demikian, ini merangkum perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik.

Referensi:

1. “Tes kolorimetri.”Biosains eksperimental.
2. “Tes Enzim Fluorometrik.”Enzim kreatif.

Gambar milik:

1. “Colorimetric Assay” oleh Sepehr Ehsani (CC BY-NC-ND 2.0) Via Flickr
2. "Fluorimeter" oleh Matthias M. - Pekerjaan sendiri (CC oleh 3.0) Via Commons Wikimedia